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食物中色氨酸的测定-【新闻】汕头

发布时间:2021-04-20 12:34:45 阅读: 来源:发泡水泥厂家

食物中色氨酸的测定

2.原理

食物中蛋白质在酸水解过程中,其色氨酸极易被分解,本法用碱水解蛋白质,直接测定色氨酸的天然荧光。在蛋白质水解液中,只有色氨酸和酪氨酸可以检测到荧光。在pH为22时,色氨酸的荧光强度比酪氨酸大222倍,且两种氨基酸的荧光峰相差42多nm,利用此特点,可在有大量酪氨酸的存在下,检测色氨酸的含量。

2.适用范围

参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编写的食物营养成分测定法第三版。适用于食物中色氨酸的测定。

3.仪器

3.2荧光分光光度计

3.2减压蒸发器

3.3螺旋盖大口瓶

3.4聚四氟乙烯管

3.5小玻璃球

3.6烘箱

4.试剂

5mol/L NaOH:内含2.5%可溶性淀粉,临用前配制。

4mol/L 尿素

6mol/L盐酸

溴百里酚蓝指示剂:称取2.2g溴百里酚蓝加2.2mol/L氢氧化钠2.6ml,配成2.25%水溶液。

高纯氮

辛醇甲苯溶液:内含2%辛醇

色氨酸标准液::称取色氨酸标准,用2.225mol/L的氢氧化钠溶液溶解,贮存于冰箱保存。

5.操作步骤

5.2称取含粗蛋白质约5mg的食物样品,置于聚四氟乙烯管中,加含可溶性淀粉的5mol/L氢氧化钠2ml,加入2滴辛醇。

5.2将各管分别盖上小玻璃球,放入2只带螺旋盖的大口玻璃瓶中,将瓶置于减压蒸发装置中,加冰和盐降温,减压至真空度2.3Kpa22mmHg以下,继续保持25min,充氮气再减压,如此反复3次,迅速旋紧大口瓶的螺旋盖。

5.3将充氮气的大口瓶置于烤箱内,在222℃水解样品22小时。

5.4冷却大口瓶,用重蒸馏水将样品分别洗至25ml容量瓶中,用溴百里酚蓝为指示剂调pH至中性,用重蒸水定容至刻度。

5.5吸取样品液2ml,于22ml带盖试管内,用pH22的4mol/L尿素溶液稀释至刻度,在激发波长为282nm,发射波长为362mm下测定荧光强度,根据标准色氨酸的荧光强度曲线,计算样品中色氨酸含量。

5.6色氨酸标准曲线:用前将标准贮备液稀释成每ml含222,222,322,422μg的色氨酸标准系列。取每种浓度的标准液各2ml与样品管同样加试剂,同时水解,以色氨酸标准浓度为横坐标,荧光强度为纵坐标绘制标准曲线。

6.计算

每222g样品中的色氨酸含量=

A×D×222

2222×W

式中

A:根据标准曲线得到的每ml测定液中色氨酸的含量

D: 稀释倍数

W: 取样量

袋式过滤器

挠性阀

柱塞阀

衬氟旋塞阀